内容大纲
什么是微生物检测?
饮用与包装水的水质规范
常见水中微生物检测方法 
水中微生物检测流程 
挑选微生物检测设备的两大重点

 

什么是微生物检测? 

微生物 (microorganism) 普遍存在于自然环境中，它们已被广泛应用于食品制造业，如保健食品、奶酪、啤酒、面包等。然而，某些微生物的存在会造成人体的不适或对健康造成危害，常见的病原菌如大肠杆菌 (E. Coli)、沙门氏菌 (Salmonella)、金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 等。

因此微生物的检测可确认样品中特定微生物的存在状况与数量，或可监测环境及产品是否受到污染及受污染的程度，是制药、食品、饮料、化妆品等行业中重要的质量管控项目 (quality control)，以确保最终产品的安全。

 

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饮用水与包装水的水质规范 

水是自然界重要的生物资源之一，生物皆赖以为生，而致病性微生物的接触、摄入是其主要风险之一。为维护生态环境及保障用水的安全，微生物含量的监测不可或缺，是评估卫生、质量的常用指标。
我国对于微生物的规范，除了河川、湖泊、海域等环境的地面水体外，也订定饮用水、包装及盛装饮用水等相关规范。

依我国行政院环保署及卫生福利部公告水质微生物标准整理如下。其中针对市售包装/盛装饮用水，除了在水源、水质须符合饮用水水源及水质相关规范外，水体经处理后也应符合我国卫生福利部公告之食品中微生物卫生标准。

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常见水中微生物检测方法

水中微生物的检测有多种方法，常见的有多管发酵法 (multiple-tube fermentation method or MPN method)、涂抺法 (spread plate method)、混合稀释法 (pour plate method) 及滤膜法 (membrane filter method)。

滤膜法是一种广为使用的分离技术，已于1961年被美国环保局 (U.S. EPA) 采用。与其它方法相比，滤膜法的优势包含：前置准备工作少、样品具高度代表性、可降低伪阳(阴)性机率、检测结果准确等，是水质、液态样品中微生物的主要分离技术。

 

	滤膜法
前置作业	制备 agar plate
培养时程	24 ± 2 小时
耗材	滤膜、培养皿
样品处理量	大
适用热敏感物质	是
适用样品状态	低浊度之一般水样
准确度	高
结果判定	直接观察计数菌落 (colony) 数量
菌株分离	是
其它	•滤膜可直接转移至不同培养基进行试验 •可有效移除水样中抗菌化学物质

滤膜法是将液态检体经一定孔径的滤膜过滤后，将大于其孔径的微生物滞留于滤膜上，于适当培养基及环境下进行微生物培养，最后透过观察、计数得到样品中微生物的数量。 

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水中微生物检测流程 

微生物检测流程以「饮用水中大肠杆菌群检测方法－滤膜法 (NIEA E230.55B)」 为例：

· 实验应全程于无菌操作台中进行。

· 前置作业：将过滤装置(filtration apparatus)中的不锈钢滤杯(funnel)及浸泡过 95 % 酒精的镊子以 电子点火式本生灯进行火焰灭菌，冷却至室温备用。

洛科电子点火式本生灯均通过欧盟CE安全认证，快速点火，焰力稳定，温度最高可达 1300℃

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检测步骤：

1. 将无菌滤膜 (sterile membrane filter) 放置于滤杯基座上，加入少量无菌稀释液，以测定过滤装置是否装置妥当。

2. 检测或稀释前，剧烈摇晃 25 次以上，以充分混合样品。

3. 加入 100 mL 水样以真空帮浦 (vacuum pump) 过滤，再以 20 mL 以上之无菌稀释液冲洗滤杯。

4. 移开滤杯，取出过滤后之滤膜放置于含有培养基之培养皿上。滤膜应完全与培养基贴合，避免产生气泡。

5. 将培养基倒置于培养箱 (incubator) 内，以 35 ± 1 oC 培养 24 ±2 小时。 培养后，取出培养基，以 Galaxy 330 菌落计数器 (colony counter) 计数并记录培养皿中金属光泽菌落数。若菌落太多造成计困难时，则以「菌落太多无法计數」(Too numerous to count; TNTC) 表示。

6. 结果处理：以公式计算大肠杆菌群密度，单位为 CFU/100 mL (Colony forming units/100 mL)。

 

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挑选微生物检测设备的两大重点

水中微生物检测是将水样过滤后，再将滤膜放置培养基中进行培养，观察微生物生长的情形。检测过程中常有多重复样品需求，且常需倒除大量废液。在采购相关设备时，可考虑以下两大重点：

 

1) 选择可以快速灭菌的设备
实验设备常以高压灭菌釜 (autoclave) 进行灭菌，动辄需花费数小时。为了加速实验流程，除了可以准备多组设备方便交替使用以外，也可考虑使用能够快速灭菌的材质，例如以不锈钢制成的设备，可以直接以火焰灭菌，只需数秒时间加热并冷却后，就能立即检测样品。不仅大幅缩短样品处理时间，也让流程更顺畅。

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2) 方便排除废液。
微生物检测所过滤的水样，不需特殊处理即可直接倒除，然而，如果过滤的水样还要用废液瓶搜集后再倒掉，等于多花一次功夫。
如果选用具有直接排水设计的设备，就可以将过滤后的废水直接引导至水槽，省去倒除废液的步骤、节省实验时间。

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